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狂犬病病毒一种促进人类诱导多能干细胞向髓核样细胞分化的新方法

热文杂谈 发布:2018-12-21dede58.com
椎间盘(IVD)退变的特征是早期髓核(NP)区域细胞数量减少,并伴有细胞外基质改变、水合作用减少和进行性退变。基于细胞的IVD治疗已成为一个备受关注的领域,有研究报告了多种细胞来源的再生潜能,包括自体或同种异体软骨细胞、原代IVD细胞和干细胞。然而,
  

  椎间盘(IVD)退变的特征是早期髓核(NP)区域细胞数量减少,并伴有细胞外基质改变、水合作用减少和进行性退变。基于细胞的IVD治疗已成为一个备受关注的领域,有研究报告了多种细胞来源的再生潜能,包括自体或同种异体软骨细胞、原代IVD细胞和干细胞。然而,很少有方法具备促进NP表型的明确策略,一部分原因在于对该细胞系明确的标志物和分化方法的了解十分有限。

  图:流程设计。示意图展示了未分化的hiPSC向NP样细胞分化的三个步骤。

  在未分化的hiPSC中,细胞系通过化学成分确定的培养基和补充的生长因子,逐步向中胚层和随后的脊索谱系定向分化,促进hiPSC的NP-基因表型。采用荧光细胞成像检测未分化细胞中的多能性标志物。在分化早期,采用RT-PCR检测潜在的细胞谱系。在分化结束时,采用免疫组化和组织学染色检验细胞的NP分化。为了富集脊索祖细胞,使用了包含转录因子brachyury(T)启动子的报告质粒和绿色荧光蛋白(GFP)荧光的慢病毒转导hiPSCs,然后通过流式细胞术,基于GFP强度对T的表达进行分选。

  初始诱导之后的团块培养期能够促进液泡化的NP细胞形态和NP表面标志物的表达,包括CD24、LM5和Basp1。已证实使用荧光激发细胞分选富集brachyury(T)阳性细胞可进一步增强NP样细胞的分化效率。

  人类iPSCs能有效地分化为NP样细胞的能力可以为NP细胞的分化过程提供新的启发,并为开发针对IVD疾病的新疗法提供了细胞来源。

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